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儲存人類血清時應注意這些要點
  • 釋出日期₪✘▩╃:2022-12-26      瀏覽次數₪✘▩╃:84
    •   人類血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體✘₪·,具有維持血液的正常粘度▩·、酸鹼度▩·、滲透壓等作用•₪╃。它主要由水和各種化學成分組成✘₪·,這些化學成分包括白蛋白▩·、α1▩·、α2▩·、β▩·、γ-球蛋白✘₪·,甘油三酯✘₪·,總膽固醇✘₪·,谷丙轉氨酶等•₪╃。血清中含有各種血漿蛋白▩·、多肽▩·、脂肪▩·、碳水化合物▩·、生長因子▩·、無機物等✘₪·,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的•₪╃。
       
        人類血清來源於非免疫的鼠宿主✘₪·,經過脂質萃取PBS溶液透析✘₪·,改善其透明度•₪╃。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍✘₪·,配成5%-20%的工作液✘₪·,直接滴加在組織切片或者細胞塗片上✘₪·,37℃度孵育10-30分鐘✘₪·,清除血清✘₪·,勿洗✘₪·,滴加適當比例稀釋的一抗工作液✘₪·,37℃孵育1-2h或4℃過夜•₪╃。注意₪✘▩╃:封閉用血清中不能含有目標蛋白✘₪·,且與一抗來源不同✘₪·,可用與二抗相同來源的封閉血清•₪╃。
       
        人類血清的儲存應該注意以下幾點₪✘▩╃:
       
        1▩·、需要長期儲存的血清必須儲存於-20℃-70℃低溫冰箱中✘₪·,4℃冰箱中儲存時間切勿超過1個月•₪╃。由於結冰時體積會增加約10%✘₪·,因此✘₪·,在凍入低溫冰箱前✘₪·,必須預留一定體積空間✘₪·,否則易發生汙染或玻璃瓶凍裂•₪╃。
       
        2▩·、熱滅活是指56℃✘₪·,30分鐘加熱已解凍的血清•₪╃。加熱過程中須規則搖晃均勻✘₪·,此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活•₪╃。除非必須✘₪·,一般不建議作此熱處理✘₪·,因為熱處理會造成沉澱物增多✘₪·,而且還會影響質量•₪╃。補體參與反應有₪✘▩╃:細胞毒作用✘₪·,平滑肌細胞收縮✘₪·,肥大細胞和血小板釋放組胺✘₪·,增強吞噬作用✘₪·,促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化•₪╃。
       
        3▩·、瓶裝血清解凍需採用逐步解凍法₪✘▩╃:-20℃至-70℃低溫冰箱中的放入4℃冰箱中溶解1天.然後移入室溫✘₪·,待全部溶解後再分裝•₪╃。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡)✘₪·,使溫度與成分均一✘₪·,減少沉澱的發生.切勿直接將其從-20℃進入37℃解凍✘₪·,這樣因溫度改變太大✘₪·,容易造成蛋白質凝集而出現沉澱•₪╃。
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